无菌实验室

无菌室的布局

1.1根据样品检验要求，一般应至少包括更衣缓冲系统、微生物限度检查室、无菌检室、阳性菌室和物流通道。

1.2更衣系统应至少包括一更（含更鞋）、二更（含洗手）、缓冲以及人流走廊等。

1.3物流通道应考虑净污分流的布局，有条件的可设置污物走廊

2.无菌室的设计要求

2.1净化级别：洁净走廊、检查室、阳性菌室应为一万级；其他房间应为十万级

2.2气流组织：阳性菌室对走廊呈负压，走廊对缓冲有5pa的正压；阳性菌室全排风

2.3电气控制：控制开关外置；设置通讯系统

3.结构与要求：

无菌洁净室不宜设在底层，防潮、防霉、采光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超过10m2，高 度 不   超 过 2.4m，由 两个 缓 冲 间、操作间 组 成。操作间 缓 冲 间之 间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。无菌室内应六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐蚀，易清洗，墙 壁 与 地 面、墙 壁 与 天花 板连 接 处应呈凹 弧 形，操 作间不得安装下水道。

无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于300 勒 克 斯。缓 冲 间和操作间应装有紫外线杀菌灯（2－25w/m3）'用于空气消毒。紫外线波长200－300nm者具有杀菌作用，其中以265－266nm杀菌作用最强，这与DNA的吸收光谱范围一致，其杀菌机理可能是在细菌细胞DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰细菌细胞DNA复制，导致细菌变异死亡。紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳，每次开灯照射时间为30min。应定期检查紫外线灯辐射强度，不得低于70μW·cm-21m距离。其缺点是穿透力弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体物，故只能用作表面消毒及一些不耐热或化学消毒剂物品的消毒。

4.温度、湿度

无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯的杀菌效果，故温度最好控制在25±2℃，相对湿度40－60％。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于49Pa。

5.操作间

无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置。洁净度要求：净化工作台洁净度为100级，无菌室应为10000级。

操作间应准备乙醇灯（或煤气灯），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、试管架、大小橡皮乳头、砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器等。微生物限度检查无菌室操作间内还应有电子称（感觉为0.1g，最大称量为300g为宜），电动匀浆仪等。

6.缓冲间

缓 冲 间 内 应 有 洗手盆，消毒液，无菌衣，帽，口 罩，拖 鞋 等，缓冲 间内 不 应 放 置 培 养 箱 和 其他杂物。

（二）无菌室的使用

1.在实验开始之前1小时启动风机系统（空调系统），并开启空气消毒装置，消毒至少半小时后关闭

2.观察并确保洁净室的压差

3.物品经物流通道进入洁净室

4.人员正确着装后经人流通道进入洁净室

5.使用完毕，应用消毒液清洁工作台面。实验人员在更衣室换下无菌工作衣后出洁净工作室。开启空气消毒装置，消毒至少半小时后，关闭洁净工作室的控制开关。

（三）无菌室的清洁维护

1.无菌室的清洁维护分为日常维护、定期维护和不符合时的维护。

2.日常维护由每次实验的实验人员进行，维护的范围为进行实验的洁净工作室和辅助洁净区，维护的频率为每次实验后。

3.定期维护由实验室指定专人进行，维护的范围为所有洁净工作室，维护的频率为每二周一次。

4.不符合时的维护由实验人员进行，维护的范围为所有不符合的洁净室，维护的时机为出现不符合时

（四）无菌室的验证

1.验证的项目：洁净度、微生物数、换气次数、静压差、照度、温度、相对湿度

2.验证的技术要求

3. 验证的周期   建议每半年一次，也可根据洁净室的使用频率适当增加验证次数。

4. 验证的方法   洁净度和微生物数：采用GB/T16292~16294-1996，其他项目：参照JGJ71－90。

5. 验证不符合项的处理

5.1当洁净度、微生物数、换气次数、静压差等指标出现不符合时，应停用洁净室，对净化系统进行调整后，在重新验证，直至符合规定才能重新启用洁净室。